2022-08-08 瀏覽次數(shù)：1733
流式細胞術(shù)是當代細胞分析技術(shù)之一，包括細胞計數(shù)、細胞內(nèi)/外抗原分子檢測、細胞中DNA和RNA的倍體分析、細胞的生物學特性及功能分析等。
對于流式細胞分析而言，樣本制備的好壞對最終的檢測結(jié)果有很大的影響。在免疫學和血液學中，應用流式細胞術(shù)分析的樣本多為外周血、骨髓、各類體液（如腦脊液、胸水、腹水）以及人體的組織（如淋巴結(jié)、脾、肝等），這幾種樣本要如何制備和保存呢？
保存方法
收集樣本后置于加有抗凝劑（一般選擇肝素或EDTA）的試管中，室溫保存，盡量在12 h內(nèi)處理樣本；若無法及時處理，4℃保存，此時最好選擇肝素抗凝管。
處理方法
一般不需要特殊處理制備單細胞懸液，所用試劑為淋巴細胞分離液和紅細胞裂解液。但在臨床檢測中，為了避免細胞成分丟失，通常不推薦使用淋巴細胞分離液分離單核細胞。
抗凝劑的選擇
血液標本可以使用EDTA、ACD（枸櫞酸葡萄糖）或肝素抗凝。
一般認為，ACD和肝素抗凝的樣本72 h內(nèi)細胞是穩(wěn)定的；EDTA抗凝48 h內(nèi)是穩(wěn)定的。
EDTA適用于白細胞的免疫表型分析，可防止成熟的髓系細胞貼壁造成細胞損失，并具有較強的抗血小板凝集能力，但對細胞活性的保持不如肝素抗凝。同時EDTA是二價陽離子的強螯合劑，會影響與Ca2+相關(guān)的抗原位點（如CD11b等），并會抑制與Ca2+ 相關(guān)的細胞功能。肝素常用于白細胞功能研究，可維持Ca2+和Mg2+在細胞內(nèi)的生理濃度，更好保持細胞活性，適用于放置時間較長、不能及時檢測的樣本，但不適合血小板的相關(guān)檢測。
骨髓樣本優(yōu)先選擇肝素抗凝。
體液
保存方法
收集樣本后置于肝素抗凝管中，室溫保存，且盡量在12 h內(nèi)處理樣本。若無法及時處理，則4℃保存，時間最好不超過48 h。
處理方法
樣本1000-1500 rpm離心5 min，棄去上清；
加入含有0.1%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液（PBS），離心洗滌5 min；
加入適量PBS重懸。如有細小沉淀，用300目尼龍網(wǎng)過濾后備用。
保存方法
切取新鮮組織樣本置于生理鹽水或PBS中，室溫保存，盡量在12 h內(nèi)處理樣本；若無法及時處理，4℃保存，保存時間最好不要超過48 h。不建議用甲醛、乙醇固定細胞，不要用酶、表面活性劑處理細胞。
處理方法
常用的組織樣本制備單細胞懸液方法有：機械法、酶處理法、化學試劑處理法及表面活性劑處理法，在流式分析中，為保持抗原活性，多采用機械法處理樣本。采用機械法需注意動作輕柔，盡量減少細胞的損傷。
若實驗室無單細胞制備儀，手工剪切制備單細胞懸液：
PBS清洗組織樣本，去除大量紅細胞；
用眼科剪將組織剪成極小塊，再次PBS清洗；
組織小塊加入勻漿器中，加少量PBS勻漿；
用細注射針頭抽取細胞懸液；
300目尼龍網(wǎng)過濾；
加入含0.1%牛血清白蛋白的PBS；
1000-1500 rpm離心5 min，棄去上清；
加入適量PBS重懸。